【Kullanım amacı】

Kit, pnömoni semptomları olduğundan şüphelenilen hastalarda ve Kümelenme vakalarında boğaz sürüntüsünde, balgamda ORF1ab, 2019-nCoV'nin N genleri nükleik asidini niteliksel olarak tespit etmek için bir TaqMan probu gerçek zamanlı floresan PCR'dir.

Test sonuçları yalnızca klinik referans amaçlıdır ve yalnızca klinik tanı için referans olarak kabul edilemez. Klinik semptomlara ve diğer laboratuvar sonuçlarına göre açık analiz yapılması önerilir.

Operatörler, gen amplifikasyonu veya moleküler biyoloji yöntem testi konusunda mesleki eğitim deneyimine sahip olmalı ve laboratuvar işlemleri için ilgili niteliklere sahip olmalıdır. Laboratuvar makul biyolojik güvenlik önlemlerine ve koruyucu prosedürlere sahip olmalıdır.

[ Test Prensibi ]

Bu kitte primerler ve problar, 2019-nCoV'nin sırasıyla ORF1ab, N'nin korunmuş ve spesifik bölgelerine göre tasarlanmıştır. Floresan PCR, örnek RNA'nın nükleik asit saflaştırmasından sonra viral RNA'yı tespit etmek için kullanılır.

Bu test kiti gerçek zamanlı floresan PCR teknolojisini kullanır. PCR amplifikasyonu sırasında prob şablona bağlanır ve probun 5'-uç raportör grubu Taq enzimi (5'→3' ekzonükleaz aktivitesi) tarafından bölünür, böylece bir floresan sinyali oluşturmak için söndürme grubundan uzaklaşıyor. Gerçek zamanlı amplifikasyon eğrisi, tespit edilen floresans sinyaline göre otomatik olarak çizilir ve örnek Ct değeri hesaplanır (Her reaksiyon tüpündeki floresans sinyali belirlenen eşiğe ulaştığında yaşanan döngü sayısı). FAM, VIC ve Texas kırmızısı floroforları, reaksiyon solüsyonunda ORF1ab genini, N gen problarını işaretlemek için kullanılır. Tek bir test kullanılarak, yukarıdaki iki 2019-nCoV geninin niteliksel tespiti aynı anda gerçekleştirilebilir.

Yanlış negatif sonuçtan kaçınmak için kit, ekstraksiyon prosedürünü ve reaksiyon solüsyonunu izlemek için kullanılabilecek Cy5 floresan grubuyla işaretlenmiş bir dahili kontrol (IC) ile sağlanır.

[ Ana Bileşenler ]

Not ¹ : Farklı bileşen partileri değiştirilemez.

Not ² :Test kiti nükleik asit ekstraksiyon reaktifi içermez, lütfen reaktifi kullanmadan önce hazırlayın.

1. Numune işleme

Nükleik asit ekstraksiyonunu gerçekleştirmek için sırasıyla 200μL pozitif kontrol ve negatif kontrole 10μL dahili kontrol ekleyin.

2. Reaktif hazırlama:

Sistemin hazırlanması: Önceden kurulmuş Nükleik asit amplifikasyon liyofilizatörünü alın, ardından folyo poşeti açın ve hemen santrifüjleyin. Her testin numune miktarı, bir pozitif kontrol ve bir negatif kontrol içeren 8'in katları olmalıdır. Her reaksiyon tüpüne 35μL nükleaz içermeyen su ekleyin.

3. Örnek Yükleme:

Test edilecek 5μL Örnek nükleik asit, pozitif kontrol, negatif kontrolü tahsis edilen reaksiyon çözeltisine tüm reaksiyon hacminin 40 μL olacak şekilde ekleyin. İnce bir karışım gerektirmez ve sadece PCR reaksiyon tüpünün kapağını kapatın, santrifüjleyin. Tüpün alt kısmındaki tüp duvarındaki sıvı, böylece PCR amplifikasyonunu işler.

Doğrulamanın ardından PCR sistemine 5μL-10μL Parafin yağı eklenmesinin PCR sonucunu etkilemeyeceği ancak kontaminasyonu ve sıvı buharlaşmasını önleyeceği tahmin edilmektedir.